通过简单的操作即可建立高质量的iPS细胞系。

 

◆推荐使用对象

● 初次尝试建立iPS细胞系的用户

● 需要高效建立细胞系,但转录因子不整合到细胞基因组的用户

● 尝试了其他方法但不成功的用户

 

◆SRV™ iPSC Vector的特点

● 在细胞质中也可稳定表达,无需整合进宿主细胞基因组

● SRV™ 载体的密码子经人工修饰优化,细胞毒性低,不容易发生干扰素诱导

● 重编程iPS细胞后,可在短时间内消除SRV™

● 人、小鼠等广泛宿主中的分裂细胞和非分裂细胞均可导入基因

● 在单个RNA上搭载所有转录因子,实现高效重编程

● 通过EGFP可以判断基因导入的效率和消除的状况

● 无需饲养细胞

● 基因导入步骤需要BSL2级别实验室,但后续过程均可在BSL1级别实验室处理

 

什么是隐形RNA载体(SRV™ )?

每年根据产业技术综合研究所(日本)开发的持续表达型仙台病毒(SeVdp)进一步改良而成的载体,在直径240 nm的类病毒粒子中包封了由人工核酸组成的一系列RNA转录基因。

● 为了避免(病毒成分导致的)干扰素诱导,使用了针对人体细胞优化的人工核酸

● 编码区和非编码区经过人工修饰,大部分非编码区来源于人mRNA

● 仅使用重编程基因表达所需的最少基因

人体细胞难以将这种载体识别为异物

SRV™ iPSC Vector的种类

SRV™ iPSC-1 Vector : siRNA导入后去除载体

SRV™ iPSC-2 Vector : 伴随重编程自动去除载体

 

导入基因表达的调节

隐形RNA载体(SRV™)可以调节导入基因的表达水平。

在SRV™ iPSC Vector 系列中,转录因子的表达根据所使用的细胞均已调整到最佳水平。

 

iPS 细胞的制备效率*

*制备效率是本产品在Feeder-free条件下的实验方案得出的内部数据。当使用其他细胞作为iPS细胞诱导的亲细胞时,应考虑实验方案的适配性。

 

※请另单独购买siRNA产品。

 

◆SRV™ iPSC-1 Vector

通过导入siRNA来去除载体,适用于成纤维细胞的重编程

SRV™ iPSC-1 Vector是一款经基因表达水平优化的,主要用于成纤维细胞制备iPS细胞的产品。它搭载了四种人源重编程基因OCT3/4、KLF4、SOX2、c-MYC 以及EGFP、Puro抗性基因。通过导入siRNA※来去除隐形RNA载体。

※对于使用SRV™ iPSC-1 Vector的实验,请单独购买siRNA。使用SRV™ iPSC-1 Vector的iPS细胞诱导方案中记载了所需siRNA的序列信息。

 

iPS细胞制备流程

使用SRV™ iPSC-1 Vector将成纤维细胞诱导为iPS细胞的示例

此数据为使用细胞基质(iMatrix511)和培养基(StemFit® Basic02N)的内部数据。如果使用其他基质或培养基,请考虑实验方案的适配性。

 

◆SRV™ iPSC-2 Vector

伴随着miR-302的表达而响应并自动去除载体的类型,适用于外周血或脐带血中含有的单核细胞的重编程!

SRV™ iPSC-2 Vector是一款经基因表达水平优化的,用于外周血单核细胞(PBMC)和CD34阳性细胞制备iPS细胞的产品,它搭载了四种人源重编程基因OCT3/4、KLF4、SOX2、c-MYC 以及EGFP、Puro抗性基因。该隐形RNA载体通过响应miR-302 的表达而自动清除。

 

iPS细胞制备流程

使用SRV™ iPSC-2 Vector将血细胞(单核细胞)诱导为iPS细胞的示例

此数据为使用细胞基质(iMatrix511)和培养基(StemFit® BasicAK02N)的内部数据。如果使用其他基质或培养基,请考虑实验方案的适配性。

 

◆SRV™ control Vector

通过隐形RNA载体确认导入的基因在各种细胞中的活性

SRV™ control Vector 是一种搭载了荧光蛋白EGFP的隐形RNA载体。

可以通过将该载体的基因导入到各种细胞来确认隐形RNA载体的导入效率。

SRV可以导入到多种细胞中,而且不论是分裂细胞还是非分裂细胞均可高效导入,但请根据使用的靶细胞,提前摸索MOI值。

◆产品列表

请在前面提到的级别或更高级别的实验室中进行实验。对于基因重组实验,需在BSL2实验室进行。

关于iPS细胞技术相关专利及产品使用的通知

SRV 产品(SRV™ iPSC-1 Vector, SRV™ iPSC-2 Vector)基于iPS Academia Japan公司和Tokiwa-Bio公司签订的共享iPS细胞技术相关专利的协议进行售卖。如果以营利为目的使用SRV开发和售卖产品等,那么请另行与iPS Academia Japan公司和Tokiwa-Bio公司签订技术相关的专利协议。 如果是非营利组织或以学术,教育为目的使用则为非营利目的。详情请通过富士胶片和光进行咨询。

※ 仅供实验研究用,不可用于临床诊断。


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